▋產(chǎn)品簡介：
膜系統(tǒng)酵母雙雜交原理：基于分離的泛素(split-ubiquitin)介導(dǎo)的膜蛋白酵母雙雜交系統(tǒng)可用于膜蛋白-膜蛋白或膜蛋白-可溶性蛋白之間的互作檢測，也可以進(jìn)行文庫篩選。泛素分子被分為 Cub 和 NubG 兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，各自連接一個(gè)已知誘餌蛋白和獵物蛋白且在膜上正常表達(dá)。Cub 一端連接轉(zhuǎn)錄激活因子LexA-VP16處于細(xì)胞質(zhì)側(cè)，當(dāng)已知誘餌蛋白和獵物蛋白存在相互作用時(shí)，由于蛋白互作使NubG 和 Cub 在空間上接近，從而形成一個(gè)完整的泛素分子，導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)側(cè)的轉(zhuǎn)錄激活因子LexA-VP16 被UBPs 切割，游離的LexA-VP16進(jìn)入細(xì)胞核，激活 His3、Ade2 與 LacZ 表達(dá)，可用相應(yīng)的缺陷培養(yǎng)基和 β-半乳糖苷酶顯色試劑盒篩選有相互作用的蛋白。UBPs 作為泛素化蛋白降解系統(tǒng)的重要組分，僅存在于細(xì)胞質(zhì)中。DUAL membrane 系統(tǒng)依賴于 bait (Cub-LexA-VP16) 和 prey (NubG) 在細(xì)胞質(zhì)被 UBPs 識別。因此需要對誘餌蛋白精確定位后選擇合適的載體，載體選擇參考表 1。
功能驗(yàn)證：NubI 為野生型的ubiquitin 的 N 端結(jié)構(gòu)，保留了原始的三個(gè) I 氨基酸結(jié)構(gòu)，NubI 可以不依賴蛋白的互作能夠直接與 Cub 結(jié)合，從而激活下游的報(bào)告基因。將 pBT3-Bait 和 pOST1-NubI 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化NMY51，涂布 DDO 、TDO 和 QDO 平板。在 DDO 平板有菌落生長，說明兩個(gè)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)成功；在 TDO 和QDO 平板有菌落生長，說明 bait 質(zhì)粒能夠適應(yīng) ubiquitin 系統(tǒng)，功能驗(yàn)證通過，可以進(jìn)行下一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。如果功能驗(yàn)證結(jié)果不通過，則需要重新更換 bait 載體。
自激活檢測：NMY51[pBT3-N-Bait+pPR3-N]在 DDO 上生長，說明兩個(gè)質(zhì)粒均成功轉(zhuǎn)入酵母菌株中，在 TDO 有輕微生長，在 QDO 培養(yǎng)基上不生長，說明 pBT3-N-Bait 在 NMY51 酵母菌株中有輕微自激活活性，也可以進(jìn)行后續(xù)篩選。
▋運(yùn)輸及儲存條件：
培養(yǎng)基系列保質(zhì)期2年，鑒定試劑盒、甘油菌保質(zhì)期1年，感受態(tài)保質(zhì)期3個(gè)月；感受態(tài)干冰運(yùn)輸，其余產(chǎn)品冰袋運(yùn)輸；各類產(chǎn)品按照標(biāo)簽所示溫度進(jìn)行儲存。
