█ 產(chǎn)品說明:
本試劑盒用于EGY48-pLacZi酵母雜交系統(tǒng)中的LacZ報(bào)告基因的檢測。當(dāng)有互作發(fā)生，LacZ報(bào)告基因表達(dá)，生成β-半乳糖苷酶，將X-Gal切割成半乳糖和深藍(lán)色的底物5-溴-4氯靛藍(lán)。
█ 系統(tǒng)工作原理
在 EGY48-pLacZi 酵母菌株中，報(bào)告基因 LacZ 的啟動子下游含有 LexA 操縱子序列。當(dāng)待測的“誘餌”與“獵物”發(fā)生特異性相互作用時(shí)，會重建一個(gè)有功能的轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合物，從而啟動下游 LacZ 報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。
█ 檢測化學(xué)反應(yīng)
LacZ 基因編碼 β-半乳糖苷酶。該酶在檢測中起到關(guān)鍵的催化作用：
1.試劑盒提供的顯色底物 X-Gal 是一種無色或淺色的半乳糖苷衍生物。
2.β-半乳糖苷酶能夠特異性水解 X-Gal 中的 β-半乳糖苷鍵。
3.水解反應(yīng)釋放出的產(chǎn)物經(jīng)氧化后，會生成一種 深藍(lán)色、不溶于水的化合物——5-溴-4-氯靛藍(lán)。
█ 結(jié)果判定
陽性互作：酵母菌落或菌斑呈現(xiàn)鮮明的藍(lán)色。
陰性對照：無相互作用的菌落保持原始顏色（通常為白色或淺黃色）。
試劑盒特點(diǎn)
1.可視化結(jié)果：顏色反應(yīng)直觀，易于觀察和記錄。
2.半定量分析：藍(lán)色的深淺與互作強(qiáng)度及報(bào)告基因表達(dá)水平在一定范圍內(nèi)相關(guān)，可用于初步比較互作強(qiáng)弱。
3.廣泛用途：是驗(yàn)證酵母雜交初篩結(jié)果、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件或進(jìn)行突變體互作分析的經(jīng)典方法。
█ 注意事項(xiàng)
1.需設(shè)置嚴(yán)格的對照組以確保結(jié)果可靠性。
2.顯色反應(yīng)時(shí)間需優(yōu)化，避免培養(yǎng)時(shí)間過長導(dǎo)致背景著色。
3.該檢測通常在固體培養(yǎng)基平板上進(jìn)行，便于菌落觀察。
